罗氏诊断产品(上海)有限公司

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公司新闻

罗氏LightMix®qPCR检测试剂盒

发布时间:2015-04-02 16:56 |  点击次数:

便捷的SNP分型检测试剂

除了对感染性病原体进行定性/定量的检测应用,实时荧光PCR系统还能应用于遗传变异的研究。

等位基因单核苷酸多态性(SNP)和结构变异是个体和群体中遗传变异的基础。这种变异影响了个体在患病风险和治疗效果上的不同。LightMix®提供了一系列检测试剂盒,为医学基础研究领域中SNP基因分型与个体疾病预测、用药治疗及疾病转归的相关性,提供了强大且便捷的研究工具。

LightMix®试剂盒采用杂交探针结合熔解曲线分析的基因分型方法,能将qPCR扩增和分型检测在同一反应管内一次完成,整个反应过程在1.5h内完成,并免去PCR-RFLP、芯片法等后续对PCR产物的处理分析过程,闭管检测大大降低了实验室PCR扩增产物污染的可能性。

LightMix® kit
MTHFR C677T基因多态性检测试剂盒


5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)是人DNA合成及同型半胱氨酸代谢中的关键酶,催化5,10-亚甲基四氢叶酸转变为5-甲基四氢叶酸,而后者为同型半胱氨酸转化为蛋氨酸的甲基供体。MTHFR 677C>T突变可造成其编码的氨基酸由丙氨酸变成缬氨酸,引起耐热性和酶活性下降。

目前国际及国内研究结果表明[1],杂合突变的MTHFR677CT酶活性下降30%,纯合677TT酶活性下降65%以上。在低叶酸的环境下,纯合677TT可显著升高血浆同型氨酸浓度,从而引起静脉栓塞、肺栓塞、动脉粥样硬化、脑卒中等疾病,携带MTHFR 677TT基因型的母亲在低叶酸环境情况下生育神经管缺陷的病儿的风险也大大增加。

试剂盒检测原理:

使用特异性引物对扩增MTHFR上233bp的片段,杂交探针序列位于233bp的片段中,并覆盖MTHFR677位点,杂交探针序列与MTHFR677野生型序列完全匹配。仅当探针与目标片段序列结合时,经由qPCR系统的激发探针产生荧光信号。

熔解曲线分析以往常用于SYBR Green检测反应后,扩增产物特异性的判断,这是基于长度和序列不同的双链DNA片段具有不同的热稳定性,表现出片段特异性的Tm值,即使得双链DNA解链一半的温度。而在LightMix®检测试剂盒中,杂交探针在扩增反应后仍然保持其完整性,在较低温度下与DNA扩增产物片段复性,在随后逐渐升温的过程中,探针/模板结合物在达到Tm值后探针从模板上脱离,导致荧光信号骤减。如有SNP存在,即MTHFR 677C>T突变,突变序列与探针结合物产生一个碱基位点的错配,导致杂交复合体的热稳定性降低,其熔解峰温度将显著低于野生型的基因序列。

运行常规的qPCR反应程序,进行目标片段的扩增和荧光信号检测,在最后阶段运行熔解曲线分析温度程序,分析软件生成的熔解曲线即可得到SNP分型检测结果。

 

◀LightMix® Kits用于SNP分型检测的试剂盒采用了杂交探针或简单探针的检测形式,通过熔解曲线的分析,获得基因分型信息。
◀杂交探针与MTHFR677CC野生型序列完全匹配,熔解峰Tm值为63℃(绿色曲线);突变的纯合677TT与杂交探针结合的热稳定性减弱,熔解峰值为54.5℃(红色曲线)。杂合型样本的熔解峰值为54.5℃及63℃。
实验数据来自TIB MOLBIOL Syntheselabor GmbH.

 
 








LightMix® kit 分型检测优势
 
 
 多项SNP分型检测试剂用于心血管疾病相关的遗传变异研究
  
检测项目 相关基因 产品货号
MTHFR C677T 亚甲基四氢叶酸还原酶基因 C677T 06896367001
MTHFR A1298C 亚甲基四氢叶酸还原酶基因 A1298C 06896383001
PAI-1 4G/5G 纤溶酶原激活物抑制物-1基因4G/5G 06896359001
IL6 G174C 白细胞介素6基因G174C 05945585001
Factor XIII AV34L 凝血因子 XIII A基因V34L 06896405001
ApoB-100 R3500Q 载脂蛋白B-100 R3500Q 07029357001
ApoE C112R R158C 载脂蛋白EC112R R158C 06703500001
CYP2C9 细胞色素 2C9*2,*3 05945712001
VKORC1  C1173T/G1639A 维生素K环氧化物还原酶 05947154001
 
 
药物代谢相关及其他基因遗传变异研究
检测项目 相关基因 产品货号
CYP2C9 细胞色素 2C9*2,*3 05945712001
CYP2C19 细胞色素 2C19*2,*3 05945739001
VKORC1  C1173T/G-1639A 维生素K环氧化物还原酶 05947154001
CYP 2D6 细胞色素 2D6  *3, *4, *5/*5 06296742001
ACE I/D 血管紧张素转化酶 07161182001
AAT Pi*S Pi*Z α-I型抗胰蛋白酶 07055684001
Factor II G20210A F2,凝血素 06896502001
Factor V (Leiden) 凝血因子 V Leiden突变 06896529001
FGB -455G/A 人纤维蛋白原ß基因 0163142001
HLA-B27 HLA-B27基因 06896537001
eNOS E298D 内皮型一氧化氮合酶基因 07023766001
IL23R Arg381Gln 白细胞介素23受体基因 05967287001
IL6 G-174C 白细胞介素6基因G-174C 05945585001
 
说明:
参考文献 [1]:Quian, X., Lu, Z. , Tan, M. et al.A meta-analysis of association between C677T polymorphism in the methylenetetrahydrofolatereductase gene and hypertension.European Journal of Human Genetics 15, 1239-1245, 2007
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